Nesta obra Leonardo da Vinci apresenta forte predominio de uma natureza andrógina de São João Batista.
Simbolicamente, São João, que auncia a nova aliança entre Deus e o homem, tem relação com o sígno da aliança, o arco iris. Na cabala o arco iris corresponde à emanação divina, denominada "Fundamento" ou o " falo cósmico". A aliança é feminina e representa uma incurção do Fundamento (falo) ao Reino (o útero, a Rainha), no qual se manifestam os poderes divinos. O " Signo da Aliança" (ot brit), por sua vez, é masculino e simboliza a circuncisão.
O caráter andrógino do arco iris é tão forte que existem muitas lendas na França, na Sérvia e na Westfália sobre personagens que mudam de sexo ao passar sob o arco iris. Mas seu peculiar caráter simbólico consiste numa fusão da androginia com uma conjunção do humano e do divino. Um mito divulgado relaciona o arco iris com as serpentes acasalando-se e, em alguns pontos da áfrica, da América Latina e da Austrália, se adora o arco iris, imagem visível da Serpente Irisada, o eixo sobre o qual giram todas as forças da natureza.
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